Calibrar pipetas

Una pipeta es un tipo de equipo de laboratorio que se utiliza para medir y transferir cantidades muy pequeñas de líquido. La exactitud y la precisión en la medición con pipetas son necesarias ya que cualquier desviación en los volúmenes dispensados ​​puede afectar los resultados de un experimento. Para garantizar la precisión, es necesario comprobar la calibración de la pipeta cada pocos meses. El proceso de calibración ayuda a verificar que el equipo esté dosificando los volúmenes correctos para poder rectificar si no es así.

Pasos

Parte 1 de 2: Comprobación de la calibración

Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 1
1. Reúne los materiales necesarios. Para verificar la calibración de una pipeta, necesitará una pipeta, puntas de pipeta, agua destilada, un vaso de precipitados, un termómetro, una balanza y platos. La balanza debe ser específica para microgramos para calibrar micropipetas con un máximo de 1 µl.
  • No necesitas más de 5 ml de agua. Llena la taza con el agua.
  • Asegúrese de que las puntas de las pipetas encajen correctamente.
Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 2
2. Medir la temperatura del agua destilada. Coloque el termómetro en el agua y déjelo reposar durante al menos un minuto. Si la línea roja del termómetro sigue moviéndose, déjalo un minuto más. Después de un minuto, anota la temperatura en un cuaderno. Retire el termómetro y séquelo cuando haya terminado.
  • La temperatura del agua es importante para los cálculos que se hacen para verificar la calibración.
  • Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 3
    3. Coloque la balanza en la balanza y póngala a cero. Lo ideal es utilizar una balanza con puertas y una habitación aislada. Coloque el cuenco en la habitación y cierre las puertas. Si no hay puertas, simplemente ponga el cuenco en la balanza. Presione el botón `Cero` o `Tara` y espere a que la balanza marque cero.
  • Al poner a cero la balanza, el peso del recipiente de plástico no está incluido y es posible medir solo el peso de lo que pones en el recipiente.
  • Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 4
    4. Preparar la pipeta para la calibración. Limpie la pipeta con etanol para eliminar cualquier contaminante antes de comenzar; también asegúrese de que la punta de la pipeta no se obstruya. Coloque la punta correcta en el extremo y configure el volumen que desea probar.
  • Para la calibración, pruebe tanto el volumen más pequeño como el volumen más grande que la pipeta puede entregar.
  • Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 5
    5. Enjuague la punta antes de calibrar. Presione el botón hasta el primer tope e inserte la punta en el agua destilada de modo que aproximadamente 2 mm queden sumergidos en el líquido. Suelte el botón para aspirar un poco de líquido, luego dispense el líquido nuevamente presionando el botón hacia abajo. Repita tres veces para enjuagar la punta.
  • Presione el botón hasta el segundo tope para dispensar cualquier líquido que quede en la punta, luego retire la pipeta del agua.
  • Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 6
    6. Aspirar el volumen de calibración. Con la punta fuera del líquido, presione el botón hasta el primer tope. Coloque aproximadamente 2 mm de la punta en el agua destilada y suelte el botón para extraer el líquido hacia la punta. Espera alrededor de un segundo antes de sacar la punta del agua.
  • Asegúrese de que la punta esté completamente sumergida durante todo el proceso de aspiración. No quieres burbujas en la punta, de lo contrario el resultado no será el correcto.
  • Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 7
    7. Dosificar el líquido en la escala de la balanza. Coloque la punta contra el fondo del recipiente y empuje la perilla hacia abajo hasta el primer tope. Muévase a otro lugar, ligeramente alejado del agua, y presione el botón hasta la segunda parada. Mantenga presionado el botón y levante la punta de la escala.
  • Mantenga la punta en la pipeta, porque la volverá a usar para hacer más pruebas de calibración. Asegúrate de que la punta no toque nada.
  • Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 8
    8. Registrar el peso indicando el saldo. Cierra la puerta cuando uses una balanza en una habitación aislada. Espere a que los valores dejen de cambiar. Escribe este valor en tu cuaderno.
  • Es importante esperar a que el número se estabilice antes de anotarlo. Tus lecturas serán incorrectas si no esperas.
  • Imagen titulada Calibración de pipetas Paso 9
    9. Repita este proceso hasta que haya tomado al menos 10 mediciones. Ponga a cero la balanza, enjuague la punta, aspire el mismo volumen, dispense el volumen y luego tome el peso. Necesita varias grabaciones del mismo volumen y luego puede promediar todas las grabaciones juntas.
  • Puede repetir este mismo proceso con diferentes volúmenes, siempre y cuando tome varias medidas por volumen.
  • Parte 2 de 2: calcular los resultados

    Imagen titulada Do Pipette Calibration Step 10
    1. Utilice la fórmula para el volumen calculado. La fórmula para calcular el volumen dispensado por la pipeta es V = w *Z, donde w es el peso del agua, Z es el factor de conversión basado en la densidad del agua y V es el volumen calculado de cuánta agua ha sido dispensado.
    • Puede encontrar la variable Z buscando la densidad del agua utilizando la temperatura registrada al comienzo del experimento.
    • Por ejemplo: si la temperatura del agua era de 23 °C, supone un valor Z de 1,0035 µg/mg.
    Imagen titulada Do Pipette Calibration Step 11
    2. Calcular la media de los ensayos repetidos. Debe haber pesado el volumen de agua dispensado por la pipeta al menos 10 veces. Para calcular el promedio de todos estos valores, súmalos y divide por 10. Si ha realizado más o menos intentos, sume cada intento y divida la suma por el número total de intentos.
  • Por ejemplo: Los diez pesos que registró para un volumen de pipeta de 10 µl son los siguientes: 9,89, 10,01, 10,02, 9,99, 9,95, 10,04, 9,96, 10,01, 9,99 y 9,98.
  • La media es: (9,89 + 10,01 + 10,02 + 9,99 + 9,95 + 10,04 + 9,96 + 10,01 + 9,99 + 9,98) / 10 = 99, 84/10 = 9984
  • Imagen titulada Do Pipette Calibration Step 12
    3. Aplicar las variables a la ecuación y resolverla. Una vez que haya determinado los valores correctos para cada variable, puede factorizarlos en la ecuación y resolver el volumen calculado. Para resolver esto, simplemente multiplique el peso promedio de todos los valores de prueba por el valor Z.
  • Por ejemplo: V = w *Z = 9,984 *1,0035 = 10,019
  • Imagen titulada Do Pipette Calibration Step 13
    4. Calcular la precisión de la pipeta. Para calcular la precisión puedes usar la ecuación A = 100 x Vpromedio/V0 uso, donde A es la precisión de la pipeta, Vpromedio el volumen promedio calculado, y V0 el valor que estableces para el cuentagotas. La precisión debe estar entre 99-101%.
  • Si la pipeta está correctamente calibrada, el valor calculado debe estar muy cerca del valor real que configuró en la pipeta.
  • Por ejemplo: A = 100 x Vpromedio/V0 = 100 x 10,019/10 = 100 x 1,0019 = 100,19 %
  • Esta pipeta está correctamente calibrada.
  • Imagen titulada Do Pipette Calibration Step 14
    5. Envíe la pipeta para su calibración, si es necesario. Si su pipeta no pasa la prueba de calibración, deje de usarla inmediatamente para experimentos. Las pipetas son piezas muy delicadas y costosas del equipo de laboratorio. No puede reparar la calibración usted mismo, por lo que tendrá que enviarla para un mantenimiento adecuado. Alternativamente, algunas compañías vendrán a su laboratorio y calibrarán sus pipetas.
  • Para obtener servicio, comuníquese con la empresa que fabrica su marca específica de pipeta.

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